Avaliação fototóxica e screening mutagênico de extratos de propolis, Aloe spp. e Hamamelis virginiana / Evaluation of phototoxic and mutagenic activity of propolis, Aloe spp. and Hamamelis virginiana extracts

A utilização de extratos vegetais em produtos farmacêuticos e cosméticos tem mostrado ser uma tendência mundial e cresceu substancialmente nas duas últimas décadas. No entanto, há ainda poucos relatos na literatura com relação à atividade mutagênica ou fototóxica de extratos vegetais. No presente trabalho foi avaliada a atividade fototóxica e o screening mutagênico de extratos fuidos e secos de própolis, Aloe spp. e Hamamelis virginiana. Na investigação de fototoxicidade foram realizados ensaios microbiológicos, utilizando cepas de Candida albicans e Saccharomyces cerevisiae, bem como ensaios biológicos com cobaias albinos. Extratos etanólicos de Ruta graveolens e Citrus spp., além de 8-metoxipsoraleno (fármaco sintético padrão), foram usados como controles positivos de ambos os testes. A atividade mutagênica foi avaliada qualitativamente segundo o spot test descrito por Maron & Ames, com cepas de Salmonella typhimurium TA97, TA98, TA100 e TA102, empregando como controle positivo o óxido de 4-nitroquinolina. Não foi observada atividade fototóxica, em ambos os ensaios realizados, para qualquer dos extratos. O ensaio microbiológico demonstrou uma atividade fungistática ou fungicida nos extratos secos de hamamélis. Os resultados obtidos nos ensaios microbiológicos com a levedura S. cerevisiae indicam que este microrganismo apresentou eficiência no procedimento de screening de atividade fototóxica comparável à obtida com C. albicans. Os extratos vegetais não apresentaram atividade mutagênica nos ensaios preliminares realizados

Atividade fotoprotetora e estudos preliminares de fotodegradação dos extratos de Aloe spp. e Hamamelis virginiana / Photoprotective activity and prliminary studies on photodegradation of Aloe spp. and Hamamelis virginiana extracts

A radiação solar, especialmente a ultravioleta, é reconhecida como a principal responsável pelo aumento da incidência de câncer em grande parte do mundo, inclusive no Brasil. A busca de substâncias com potencial ação fotoprotetora é uma importante ferramenta no combate a esta neoplasia. O objetivo deste trabalho é avaliar a ação dos extratos vegetais de Aloe spp. e H. virginiana como filtro solar, assim como da associação destes extratos ao filtro sintético p-metoxicinamato de 2-etilhexila. Estudos preliminares de fotodegradação destes extratos, frente à radiação visível e UVB, também foram realizados. Os extratos foram obtidos por extração em forno de microondas e concentrados a extratos fluidos e secos. O fator de proteção solar (FPS) de soluções contendo 3 e 10 por cento (p/V) dos extratos foi determinado por método espectrofotométrico in vitro. Os extratos secos apresentaram valores de FPS maiores que os extratos fluidos. A associação destes extratos ao filtro sintético resultou em aumento nos valores de FPS, sugerindo um efeito sinérgico. Nos estudos de fotodegradação foi observado que o extrato de hamamélis não sofreu alteração no perfil de absorção, após exposição à radiação visível e a UVB. No extrato de Aloe, no entanto, foram observadas alterações no perfil de absorção, quando incidido pelas duas radiações, mas somente a exposição à radiação UVB levou à diminuição de 2 unidades no FPS.

Activity and stability of a Rhizomucor miehei lipase in hydrophobic media.

The effects of detergents and organic solvents on a commercial lipase (Lipozyme) from Rhizomucor miehei were investigated. It was shown that the detergent sodium cholate is possibly an activator of the enzyme, increasing lipase activity 2.5 times (250% of the control) when the enzyme was preincubated with 7 mM cholate. Lipozyme activity was over twice as high (230% of the control) in the presence of 80 mM Tween 80 or 90 mM Tween 20 (polyoxyethylenesorbitan monolaurate), apparently through an additional emulsifying action on the substrate. Preincubation with Tween 80 (polyoxyethylenesorbitan mono-oleate) did not affect enzyme activity. In contrast, lipase activity was completely inhibited in the presence of an 8.9 mM concentration of another non-ionic detergent, Brij 58, whereas with a 16.4 mM concentration of the cationic detergent cetyltrimethylammonium bromide (CTAB), enzyme activity was reduced by 80%. Preincubation of Lipozyme with the same concentrations of Brij 58 [poly(oxyethylene)20 cetyl ether] and CTAB promoted total inactivation of the enzyme. Organic solvents had different effects on lipase activity and stability. Of the tested solvents, hexane was least deleterious to lipase activity and did not alter enzyme stability on preincubation. These results suggest that Lipozyme can be used in esterification reactions with hexane as solvent or in hydrolysis reactions with Tween 20 or Tween 80 as emulsifying agents, after pretreatment with sodium cholate.

Partial purification and characterization of the interconvertible forms of trehalase from Saccharomyces cerevisiae.

Cryptic trehalase from Saccharomyces cerevisiae was purified about 3000-fold. The recovery of 970% of the original "activity" indicated the removal of an inhibitor of the enzyme. Active trehalase, obtained through phosphorylation of cryptic trehalase by cAMP-dependent protein kinase, was isolated by chromatography on DEAE-cellulose. A major phosphorylated protein, with an apparent Mr of 86,000, was detected after SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. This protein band correlated exactly with the elution profile of trehalase activity and 32Pi incorporation into the enzyme on DEAE-cellulose chromatography. Partially purified active trehalase showed absolute specificity towards trehalose with an apparent Km of 4.79 X 10(-3) M. Both forms of the enzyme showed an apparent molecular weight of 160,000, by gel filtration. Centrifugation on a glycerol density gradient indicated multiple forms of trehalase-c, with Mr of 320,000, 160,000, and 80,000. After activation of each of these forms by protein kinase, a single form of trehalase-a was observed, with a Mr of 160,000. Trehalase-c appears to be a totally inactive form of the enzyme. The only mechanism of activation seems to be phosphorylation by cAMP-dependent protein kinase. When the protein kinase concentration was varied, at a fixed trehalase-c concentration, a sigmoidal activation plot was obtained. This result suggests the occurrence of multiple forms of cryptic trehalase.